精確稱取粉碎后的樣品1 g，加入人工腸液10 mL，置于37℃水浴中超聲處理適當(dāng)時間，搖勻取適量靜置約24 h，吸取1 mL中層溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，精密量取濾液1 mL，用0.125 mol/L鹽酸溶液稀釋至10 mL，搖勻后即得。同法制備加標(biāo)液及空白溶液。

LC條件：色譜柱，ZORBAX EclipsePlus C18（4.6 x 150 mm，5 μm）；流 動 相 A，0.01 mol/L乙酸銨 + 0.12% L-半胱氨酸，氨水調(diào)節(jié)pH=7.5；流動相B，甲醇；流動相梯度，流動相A，0-5.0 min 92%，6.0-9.0 min 55%，11 min 92%；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣體積50 μL；柱溫30℃。

ICP-MS條件：RF功率 1550 W，冷卻氣14 L/min，輔助氣1.1 L/min，霧化氣1.25 L/min，泵速 15 rpm，霧化室溫度2℃，采樣深度3.53 mm，駐留時間40 ms，掃描次數(shù)10次，碰撞氣4 mL/min，Hg質(zhì)量數(shù)202。

考察混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中二價汞、甲基汞和乙基汞等各形態(tài)汞的分離度，可有效提高分析效率并保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。二價汞、甲基汞和乙基汞的色譜分離如圖1所示。

按照實驗條件將50 μg/L的二價汞、甲基汞、乙基汞混合標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣測定6次，記錄響應(yīng)值。實驗結(jié)果顯示，二價汞、甲基汞、乙基汞的響應(yīng)值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于5.0%，表明方法精密度良好。

采用本法測定安宮牛黃丸、人參再造丸、牛黃清心丸、牛黃千金散、天王補(bǔ)心丹、柏子養(yǎng) 心丸、益元散等含朱砂的中成藥中的各形態(tài)汞的含量，發(fā)現(xiàn)除二價汞外，僅在牛黃千金散中檢出含量為0.0063 mg/kg的甲基汞，其它藥物樣品均未檢出。對牛黃千金散樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗，結(jié)果見表2。

雄黃為硫化物類礦物，其主要成分為As2S2或As4S4，另含有少量的可溶性砷鹽，以As2O3為主。其常用于癰腫疔瘡，蛇蟲咬傷，蟲積腹痛等疾病的治療。近年來，雄黃在治療血液系統(tǒng)腫瘤及白血病等血液類疾病方面有顯著成效。雄黃中的砷形態(tài)主要為無機(jī)砷（As3+和 As5+），其毒性高于有機(jī)砷。雄黃中 As2O3既是藥效部分，也是毒性部分。因此，雄黃及含雄黃成方制劑的毒性和安全性備受關(guān)注。

準(zhǔn)確稱取雄黃樣品粉末30 mg（精確到0.1 mg），置于250-mL容量瓶中，加入人工腸液約200 mL搖勻，置37℃水浴中超聲處理（功率300 W，頻率45 kHz）2 h（每隔15 min充分搖勻依次），冷卻后用人工腸液稀釋至刻度，搖勻，取適量置50-mL塑料離心管中，靜置20~24 h。用洗耳球輕輕吹去上層表面溶液，吸取中層溶液約15 mL（吸取時應(yīng)避免帶入顆粒），用0.45 μm微孔濾膜過濾，精密移取濾液5 mL，置50-mL容量瓶中后，用0.02 mol/L乙二胺四乙酸二鈉稀釋至刻度，搖勻，待測。同法制備加標(biāo)液及空白溶液。

LC條件：色譜柱，PRP-X100 陰離子交換色譜柱（250 mm × 4.1mm，10 μm）；流動相A，0.025 mol/L磷酸二氫銨溶液（氨水調(diào)節(jié)pH8）；流動相B，水；流動相梯度，流動相A，0-15.0 min，0.0-100%；20min，0.0%；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣體積100 μL；柱溫30℃。

ICP-MS條件：RF功率 1600 W，冷卻氣 14 L/min，輔助氣 1.0 L/min，霧化氣 1.28 L/min，泵速 15 rpm，霧化室溫度2℃，駐留時間 10 ms。

考察混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中As3+和 As5+等不同價態(tài)的無機(jī)砷的分離度，可有效提高分析效率并保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。As3+和 As5+的色譜分離如圖2所示。

配置系列濃度的As3+和As5+的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以As3+和As5+響應(yīng)值與其對應(yīng)濃度為坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得As3+和As5+標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)r分別為0.9995和0.9997。按3倍噪音（S/N=3）作為響應(yīng)值計算對應(yīng)的濃度，即得到As3+和As5+的檢出限（LOD）分別為0.02 μg/L和 10.5 μg/L。

按照實驗條件，將雄黃樣品提取液連續(xù)6次重復(fù)進(jìn)樣測定，記錄As3+和As5+的響應(yīng)值。實驗結(jié)果顯示，As3+和As5+響應(yīng)值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為3.7%和2.5%，表明方法精密度良好。

采用本法測定雄黃樣品中不同價態(tài)無機(jī)砷的含量，樣品分離色譜圖如圖3所示，三次測定結(jié)果見表3。在雄黃樣品溶液中加入一定量的As3+和 As5+標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合均勻后放置過夜，通過超聲提取，測定樣品加標(biāo)回收率，結(jié)果見表 3 。

本文參考中國藥典通則《2322汞和砷形態(tài)分析及其價態(tài)測定法》，以及藥典中關(guān)于雄黃樣品的前處理，采用 LC-ICP-MS 測定雄黃樣品中無機(jī)砷形態(tài)的含量。雄黃樣品中As3+、As5+的加標(biāo)回收率分別為108%和104%，響應(yīng)測定值的RSD分別為 3.7%和 2.5%，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性系數(shù)R均大于0.9995，方法檢出限分別為0.02 μg/L和10.5 μg/L，表明本方法適用于雄黃中不同價態(tài)無機(jī)砷的測定。