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β-淀fen酶（β-amylase，β-AL）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

β-淀fen酶試劑盒 淀粉系列

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

淀fen酶負(fù)責(zé)水解淀粉，主要包括α-淀fen酶和β-淀fen酶。β-淀fen酶(EC 3.2.1.2)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。

測定原理：

還原糖還原 3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α-淀fen酶不耐酸，β-淀fen酶不耐熱。根據(jù)上述特性，鈍化其中之一，就可測出另一種淀fen酶的活力。

組成：

試劑一：50ml×1 瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需 90℃加熱溶解后再用；試劑二：40ml×1 瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需 70℃加熱后再用。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

粗酶液制備：

組織：稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本），加入 1ml 蒸餾水，研磨勻漿；將勻漿倒入離心管中，提取液在室溫下放置提取 15min，每 5min 振蕩 1 次，使其充分提?。?000g，25℃離心 10min，取上清液加蒸餾水定容至 10 ml，搖勻，即淀fen酶原液。

吸取上述淀fen酶原液 1ml，加入 4ml 蒸餾水，搖勻，即為淀fen酶稀釋液，用于（α＋β）淀fen酶總活力的測定。

血清（漿）等液體樣本：（1）直接檢測α-淀fen酶。（2）吸取淀fen酶原液 1ml，加入 4ml 蒸餾水，搖勻，即為淀fen酶稀釋液，用于（α＋β）淀fen酶總活力的測定。

測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一和試劑二 40℃預(yù)熱 10min。

3、測定操作表：

70℃水浴 15min 左右，冷卻

在 40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫 5min

混勻，95℃水浴 5min，冷卻，在 540nm 下測定吸光度，從左到右分別記為A1、A2、A3 和A4。

酶活性計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778； x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值。

2、α- 淀fen酶活性

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/g 鮮重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W

按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T

=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr

血清（漿）等液體樣本中α- 淀fen酶活性計(jì)算

單位定義：每 ml 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/ml)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778)

3、總淀fen酶活性計(jì)算

按照樣品質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

總淀fen酶活性(mg/min//g 鮮重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W

按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

總淀fen酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T

=0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr

血清（漿）等液體樣本中總淀fen酶活性計(jì)算

單位定義：每 ml 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位?？偟韋en酶活性(mg/min/ml) =5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T=0.5375×(A4-A3＋0.1778)

4、β-淀fen酶活性計(jì)算

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

β-淀fen酶活性(mg/min/g  鮮重)=淀fen酶總活性-α-淀fen酶活性=[5.375×(A4-A3＋0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W

按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

β-淀fen酶活性（mg/min/mg prot）=淀fen酶總活性-α-淀fen酶活性=[0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075× (A2-A1＋0.1778)]÷Cpr

血清（漿）等液體樣本中β-淀fen酶活性計(jì)算

單位定義：每ml 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位。

β-淀fen酶活性（mg/min/ml）=淀fen酶總活性-α-淀fen酶活性=0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)

5：總淀fen酶稀釋倍數(shù)；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 ml； V 樣總：提取液總體積，10 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，5min。

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