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淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

淀粉脫分支酶試劑盒 淀粉系列

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

DBE 能夠?qū)Ｒ恍缘亓呀庵ф湹矸鄣摩?1，6 糖苷鍵，產(chǎn)生線性的葡萄糖鏈，在調(diào)整支鏈淀粉分子的鏈長方面有重要的作用。

測定原理：

采用 3，5-二硝基水楊酸法測定 DBE 催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過測定還原糖含量的變化來計算DBE 活性。

組成：

試劑二臨用前每支加入 6mL 試劑一，充分混勻后備用；用不完的試劑 4℃保存；

自備儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

粗酶液制備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表

混勻，37℃準(zhǔn)確保溫 2h

混勻，95℃水浴 5min，于 1mL 玻璃比色皿 540nm 處讀取各管吸光值。ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設(shè)個一個對照管。

注意：可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進行 5min 95℃沸水浴處理。

DBE 活力單位的計算：

標(biāo)準(zhǔn)條件測定回歸方程為y = 3.8458x - 0.165；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

按照蛋白濃度計算

單位的定義：每mg 組織蛋白每h 催化產(chǎn)生 1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

DBE 活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr

按樣本鮮重計算

單位的定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

DBE 活力(mg /min /g 鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T

=0.26× (ΔA+0.165) ÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL； V 樣：加入樣本體積，0.2mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL； T：反應(yīng)時間，2 h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為 0.1mg/mL-1mg/mL。 ΔA 線性范圍為 0.01-2。

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