產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是基于蛋白質(zhì)鹽析和透析原理開(kāi)發(fā)的非變性蛋白質(zhì)濃縮產(chǎn)品。其原理  是將大量具有很強(qiáng)水化能力的硫酸銨加到蛋白質(zhì)溶液中，奪取蛋白質(zhì)分子的水化層（龍其是蛋白質(zhì)表面非極性區(qū)的水化層），使之“失水"，于是蛋白質(zhì)分子間的非極性基團(tuán)將互相結(jié)合，使蛋白質(zhì)形成沉淀，離心分離沉淀后，再用透析方法將  蛋白質(zhì)中的鹽除去，即得濃縮的蛋白質(zhì)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.一站式，包涵鹽析和透析所需的成分，用戶(hù)只需提供所需沉淀的蛋白。

2.適用于大多數(shù)蛋白，是否適用于某種具體的蛋白，需要預(yù)先實(shí)驗(yàn)。

3.非變性法，不會(huì)破壞蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)和活性，尤其是適用于對(duì)變性敏感的  酶溶液。

4.得到的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，適合于長(zhǎng)期保存。

5.非變性法蛋白沉淀試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

非變性法蛋白沉淀溶液 A50 mL×1060 mL 本色瓶

去離子水50 mL60 mL 本色瓶

0.5M EDTA 溶液0.5 mL1.5 mL 白蓋管

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存，保存期限為 12 個(gè)月。

自備試劑

透析液

使用方法：

注意：除對(duì)溫度敏感的蛋白質(zhì)樣品需在 4℃環(huán)境下（如冷室）操作外，一般可在室溫中操作，操作者整個(gè)操作須戴好手套。

一：鹽析沉淀

1.測(cè)量待濃縮蛋白質(zhì)樣品的體積，并將其轉(zhuǎn)移到容積至少是樣品體積兩到三倍  的無(wú)菌燒杯或玻璃三角瓶中。注意：需要處理的蛋白質(zhì)樣品最好溶解在 pH 為中性的緩沖液中（如 50 mM 的 Tris-HCl），濃度最好在 1mg/mL 以上。

2.將一個(gè)無(wú)菌的磁力攪拌子放入三角瓶中，再將三角瓶放置在磁力攪拌器上，  打開(kāi)開(kāi)關(guān)后緩慢攪拌。注意：攪拌過(guò)程中不能產(chǎn)生泡沫。

3.如果待濃縮蛋白容易被金屬離子失活或抑制，則最好加入 EDTA 溶液，使其終濃度為 10 mM，否則此步可省略。

4.小心緩慢加入所需的非變性法蛋白沉淀溶液 A（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“溶液 A"，注意用前需要搖勻），再將溶液 A 和蛋白溶液按 1:1 的比例緩慢混合（具體操作時(shí)最好每次少量加入，切莫一下倒入，否則蛋白質(zhì)容易變性）?；旌线^(guò)程中，  蛋白質(zhì)沉淀可能會(huì)使溶液呈牛奶狀，屬于正?，F(xiàn)象。不要增加溶液 A 的使用比例，否則溶液比重過(guò)大，難以在后面的離心中把蛋白質(zhì)沉淀下來(lái)。

5.將所需溶液 A 全部加入后，冰上放置 60 分鐘或過(guò)夜讓蛋白質(zhì)充分沉淀。注意：血紅蛋白、肌紅蛋白和清蛋白等在較高的溫度 25℃比在 0℃度時(shí)溶解度低，更容易鹽析，所以濃縮這些樣品時(shí)冰浴放置可以改為室溫放置。有的蛋  白質(zhì) 15-20 分鐘就可以完-全沉淀，有的則需要數(shù)小時(shí)。

6.將溶液輕移到旋蓋塑料離心管或離心瓶中，在平衡條件下 15000×g 4℃離心15 分鐘。注意：溶液比重很大，一定要重量上平衡而非體積平衡。

7.小心棄上清，得到蛋白質(zhì)沉淀。此沉淀可以在 4℃放置數(shù)月。

8.將盡可能少的無(wú)菌水或其他緩沖液加入蛋白質(zhì)沉淀中使之溶解，所加體積一  般是沉淀物體積的 1-2 倍。如果沉淀溶解后非常粘稠，可以適當(dāng)補(bǔ)加無(wú)菌水使其變得不粘稠。此沉淀可以在 4℃放置幾天。

9.如果溶液中有不溶物（主要是變性的蛋白質(zhì)），可以 15000×g 4℃離心 15 分鐘，留上清。

10.上清液可以用于 SDS-PAGE 電泳檢測(cè)或 UV 法蛋白質(zhì)濃度測(cè)定。

11.如果后續(xù)純化方法是疏水層析或排阻層析，則不需要將溶液中殘留的鹽去  掉，可以直接使用。如果后續(xù)純化是離子交換層析，則需要將溶液中殘留的  鹽去掉，一般采用透析法，具體操作見(jiàn)附一。

附一：透析脫鹽

1.將蛋白溶液轉(zhuǎn)移到一端已經(jīng)封口的透析袋內(nèi)，預(yù)留一些液體膨脹的空間，然  后將另一端封口。注意：用戶(hù)需要預(yù)處理透析袋，預(yù)處理的方法是將透析袋  在含 2%（W/V）碳酸-氫鈉和 1 mM EDTA 的溶液中煮沸 10 分鐘，用蒸餾水徹-底清洗透析袋，然后放在 1 mM EDTA 的溶液中煮沸 10 分鐘并浸沒(méi)在此溶液中冷卻，最后放 4℃保存待用。取用時(shí)必須要戴手套。

2.將透析袋放置在裝有透析液的容器中，透析液的體積必須是蛋白質(zhì)溶液的20-100 倍，溶液最好處于攪拌狀態(tài)。用戶(hù)可以用適合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的任何緩沖液作為透析液。每次透析 3-4 小時(shí)，共透析 2-3 次。可以用自備的萘氏試劑檢測(cè)透析袋外面溶液是否還有殘留的銨離子來(lái)檢測(cè)透析是否完成。

3.將透析后的溶液全部轉(zhuǎn)移到離心管中，15000×g 4℃離心 15 分鐘，上清液即為濃縮后的蛋白溶液?？梢苑?80℃冰箱保存或立即用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

4.如果需要快速測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度，可取少許樣品作適當(dāng)倍數(shù)稀釋后，用紫外分光光計(jì)測(cè) 280nm 和 260nm 的光吸收，再計(jì)算其濃度，計(jì)算公式為：蛋白濃度(mg/mL)＝(1.45×OD280-0.74×OD260)×樣品稀釋度。

附二：多克隆抗體的濃縮

1.將待處理的血清樣品在 4℃或室溫 20000×g 離心 30 分鐘，收集上清。

2.取上清 20mL 與等體積的自備生理鹽水混合后，于攪拌下緩慢滴加 40 mL 非變性法蛋白沉淀溶液 A。注意：加等量生理鹽水的目的是將蛋白質(zhì)含量降低到 2.5-3.0%，否則其他蛋白質(zhì)會(huì)跟抗體一起共沉淀。

3.冰上放置 30 分鐘以上或過(guò)夜，使蛋白質(zhì)充分沉淀。

4.將溶液轉(zhuǎn)移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心 10 分鐘，棄上清。

5.用 12 mL 自備生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀。

6.于攪拌下緩慢滴加 8 mL 溶液 A，冰上放置 1 小時(shí)使蛋白充分沉淀。

7.將溶液轉(zhuǎn)移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心 10 分鐘，棄上清。

8.用 13.3 mL 生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀。

9.于攪拌下緩慢滴加 6.6 mL 溶液 A，冰上放置 1 小時(shí)使蛋白充分沉淀。

10.將溶液輕移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心 10 分鐘，棄上清。

11.用少許生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀，并轉(zhuǎn)移

到透析袋中。

12.用大于 20-100 倍體積的PBS 于 4℃對(duì)蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行透析，更換透析液數(shù)次， 然后讓蛋白質(zhì)溶液置-80℃保存或用其他方法進(jìn)一步純化。

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