產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是在本公司過柱法植物 RNA 提取試劑盒的基礎(chǔ)上經(jīng)過配方和流程優(yōu)化得到的無酚無氯仿升級產(chǎn)品，它結(jié)合了植物 RNA 提取試劑盒的高效性、快捷性以及無氯仿處理的安全性。

產(chǎn)品特點：

1.免酚和氯仿處理，操作安全可靠。

2.簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘。

3.RNA 純度更高，平均OD260/280 一般都在 2.0 左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。

4.目前已測試過上百種植物。

5.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交和 cDNA 合成等實驗。

6.本產(chǎn)品足夠 50 次微量提取，每次可以處理 50-200 mg 植物材料。

7.性價比高于進口的柱式植物 RNA 提取產(chǎn)品。

8.無酚無氯仿植物RNA-提取試劑盒（過柱法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

無酚無氯仿植物 RNA 提取溶液A50 mL60 mL 本色瓶

無酚無氯仿植物 RNA 提取溶液 B50 mL60 mL 本色瓶

離心吸附柱（寬口）30 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

RNA 洗脫液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

常溫運輸及保存，有效期一年。

自備試劑

無

使用方法：

注意：如果無酚無氯仿植物 RNA 提取溶液 A（以下簡稱溶液 A）低溫下可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹-底溶解并充分搖勻后再取用。

1.估算組織細胞的用量。每次微量提取一般需要 50-100 mg 植物葉片、或 30-50 mg 植物種子、或 100-200 mg 植物果實。不能多加，否則容易堵柱。無氯仿提取處理的量比常規(guī)的加氯仿處理量要少一倍，否則非常容易堵柱，但是否堵柱又取決于植物組織的多糖多酚的濃度。

2.勻漿法裂解樣品:先將新鮮植物組織-剪切成小塊放入 10-15 mL 塑料離心管中， 加入 1 mL 溶液A，然后用勻漿器勻漿 5-20 秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。

3.或液氮研磨法裂解樣品（適用于復(fù)雜，易降解樣品）：取適量新鮮植物組織放入含液氮的研缽中，迅速將組織研磨成粉末后，將粉末轉(zhuǎn)移到合適的塑料離心管中， 加入 1 mL 溶液 A，立即劇烈振蕩 20 秒，充分混勻。

4.將勻漿物或液氮研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5mL 塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細胞碎片)。有的植物組織(比如果實)含有大量水份，勻漿液會多于 1 mL，轉(zhuǎn)移時也只取 1 mL。

5.室溫 15000 g 離心 3-5 分鐘，管底沉淀為細胞破碎物。

6.將上清液 (約 1 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的 2 mL 塑料離心管中。

7.加入等體積的無酚無氯仿植物 RNA 提取溶液 B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對某些植物，屬于正?，F(xiàn)象)，不必去掉沉淀，把所有的混合物上柱。

8.將 0.7 mL 的混合溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，15000 g 室溫離心 3 到 5 分鐘， 棄穿透液。如果離心吸附柱里面有殘留液體沒穿透，可以延長離心時間直到徹-底穿透。

9.將剩下的混合溶液按每次 0.7 mL 的方式轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，每次 15000 g 室溫離心 3-5 分鐘，棄穿透液。

10.由于混合液有 2mL 左右，所以三次轉(zhuǎn)移即可將混合液全部掛柱。

11.加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫 15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。如果離心吸附柱里面有殘留液體沒穿透，可以延長離心時間直到徹-底穿透。

12.再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫 15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。

13.15000 rpm 室溫離心 10 秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的乙醇會影響 RNA 的使用。

14.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50 μL RNA 洗脫液，室溫放置 2 分鐘。

15.15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

16.RNA 完整性的電泳檢測:如果需要做 Northern 雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行 RNA 電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA 分子。

17.RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將 5-10μL RNA 溶于TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在 OD260 的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA 濃度(1 OD260 的 RNA=40 μg/mL)，進而計算出 RNA 的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA 產(chǎn)量/組織用量)。

18.RNA 純度測定:無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。

選擇我們的無酚無氯仿植物RNA-提取試劑盒（過柱法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！